Elucidating molecular network of Dravet syndrome by genetic approaches

通过遗传学方法阐明 Dravet 综合征的分子网络

• 批准号: 19K17381
• 负责人: 石井 敦士
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Fukuoka International University of Health and Welfare (2022)International University of Health and Welfare (2021)Fukuoka University (2019-2020)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2019
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2019-04-01 至 2023-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19K17381/
• 关键词: てんかん; ドラべ症候群; バリアント; ネットワーク; 遺伝子; 次世代シークエンサー; ドラベ症候群; エクソーム解析; 遺伝子解析; 発達性てんかん性脳症

ドラベ症候群の分子ネットワークを明らかにすることを目的に、500症例の発達性てんかん性脳症症例を解析した。抹消リンパ球より抽出されたゲノムDNAを用いて、てんかん関連の114遺伝子のエクソンを含む領域にプローブを設計しライブラリを作成した。次世代シークエンサーMiseq（イルミナ社）でシークエンスを行い、fastq fileを参照ゲノム配列hg19を使用してバリアントを抽出したvcf fileを作成した。AnnotationはANNOVARを使用し、1000 genome, ExAC, gnomADデータベースで新規バリアントを抽出し、SIFT、 PolyPhen2、CADDスコアで有害性が予測されるバリアントを候補とした。候補バリアントに対して、両親のゲノムDNAでバリアントの有無をPCRサンガー法で確認し、新生バリアントを病的バリアントとした。Na+、K+、Cl-チャネル、GABAA受容体等のイオンチャネル、イオンチャネル内蔵をコードする遺伝子を対象とした。ドラべ症候群337症例、その他の発達性てんかん性脳症163症例の合計500症例で病的バリアントを探索し、121症例（ドラべ症候群95症例、発達性てんかん性脳症26症例）に病的バリアントを同定した。トップ5の遺伝子は、SCN1Aに85症例、SCN8Aに7症例、KCNT1に5症例、KCNQ2に4症例、GABRB2に3症例であった。チャネル種類に分類すると。Na＋チャネルに93症例、K+チャネルに12症例、GABAA受容体に7症例であった。Na＋チャネルが最も多いが、K＋チャネル、GABAA受容体と抑制性のチャネルが続き、抑制性チャネルのバリアントの関与も示唆された。

分析了500例病例的发育性癫痫病例，目的是阐明Drava综合征的分子网络。使用从擦除的淋巴细胞中提取的基因组DNA，探针被设计为在包含与癫痫相关的114个基因外源的区域中创建探针，以创建文库。下一个代代shiksenger Miseq（Illumina）制作了一个序列，并创建了一个VCF文件，该文件使用用于FastQ文件的基因组阵列HG19提取变体。注释使用了Annovar，在1000个基因组，EXAC，GNOMAD数据库中提取了新变体，并制造了一种在SIFT，Polyphen2和CADD评分中可预测的变体。对于候选变体，父母的基因组DNA证实了PCR Sanger的存在或不存在，并使新变体成为病理变体。靶标是编码内置离子通道的Na+，K+，Cl通道，GABAA受体和基因的离子通道。为了寻找总共500例DRABE综合征病例337例和其他发育性癫痫病163例，总共探索了500例病例，并确定了121例病例（95例DRABE综合征，26例发育性流行病病例） 。排名前五的基因是SCN1A中的85例，SCN8A的7例，KCNT1中的5例，KCNQ2中的4例，GABBRB2中的3例。当分类为通道类型时。 Na+通道上有93例，K+通道中有12例，GABAA受体中有7例。 Na +通道是最常见的，但是遵循的K +通道，GABAA受体和抑制通道，表明涉及抑制通道变体。

项目成果

KCNA2遺伝子変異に伴うてんかん性脳症の1男児例

KCNA2基因突变导致男孩癫痫性脑病1例

• 发表时间: 2019
• 作者: 重田 英臣;福田 智文;柴原 淳平;五十嵐 亮太;石井 雅宏;楠原 浩一;石井 敦士;廣瀬 伸一
• 通讯作者: 廣瀬 伸一

Regional specificity of KCNQ2 missense variants causing benign or epileptic encephalopathy phenotype.

KCNQ2 错义变异的区域特异性导致良性或癫痫性脑病表型。

• 发表时间: 2019
• 作者: Atsushi Ishii;Ayako Goto;Mami Shibata;Yukiko Ihara;Shinichi Hirose
• 通讯作者: Shinichi Hirose

遊走性焦点発作を伴う乳児てんかんにおける発作抑制期間と発達予後の関連

伴有游走性局灶性发作的婴儿癫痫发作抑制持续时间与发育预后的关系

• 发表时间: 2019
• 作者: 野村 敏大;本橋 裕子;石山 昭彦;竹下 絵里;齋藤 貴志;小牧 宏文;中川 栄二;須貝 研司;才津 浩智;藤田 京志;松本 直通;石井 敦士;廣瀬 伸一;佐々木 征行
• 通讯作者: 佐々木 征行

てんかんの遺伝子研究の進歩

癫痫遗传学研究进展

• 发表时间: 2019
• 作者: Atsushi Ishii;Ayako Goto;Mami Shibata;Yukiko Ihara;Shinichi Hirose;Atsushi Ishii;石井 敦士
• 通讯作者: 石井 敦士

The effectiveness of intravenous benzodiazepine for status epilepticus in Dravet syndrome.

静脉注射苯二氮卓类药物治疗 Dravet 综合征癫痫持续状态的有效性。

• DOI: 10.1016/j.braindev.2022.01.004
• 发表时间: 2022
• 期刊: Brain Dev
• 作者: Kikuchi K;Hamano SI;Matsuura R;Nonoyama H;Daida A;Hirata Y;Koichihara R;Hirano D;Ishii A;Hirose S.
• 通讯作者: Hirose S.