Elucidation of the effect of basic fibroblast growth factor to prevent bisphosphonate-related osteonecrosis of the jaws

阐明碱性成纤维细胞生长因子预防双膦酸盐相关颌骨坏死的作用

基本信息

批准号：
20K18734
负责人：
今田光彦
金额：
$ 2.16万
依托单位：
Nara Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

BRONJ発症モデルに対し抜歯窩内にβ-TCPを填入した研究について、一昨年に行った実験では抜歯後1週でβ‐TCPと周囲肉芽組織を摘出しLC-MS/MS分析でゾレドロン酸(ZA)濃度を検証したところ、β‐TCPからは本来検出しないZAを検出し、またβ‐TCPを填入しない群と比較すると肉芽組織中のZA濃度の減少を認めた。今年度は両群の肉芽組織からプロテオーム解析を行い関連タンパク質の検討を行った。すると有意差のあったタンパクのうち非特異的な上皮/筋組織関連を除外すると、Atg9a、LC-3、Rubiconといったオートファジーに関連するタンパク質の発現に大きな変動を認めた。そこでAtg9a、LC-3、Rubiconの他、創傷治癒のマーカーとなるCD68、α-SMA、Ki-67の免疫組織化学染色を行い、高倍率視野を各4視野をランダムに抽出し、発現状況を比較した。結果、Atg9a、LC-3は、上皮細胞での発現は認めず、上皮下の単核炎症性細胞(MIC) において、β-TCP填入群で発現増強していた。 Rubiconは、上皮細胞においてβ-TCP填入群で発現抑制を認めた。MICでは両群で有意差は認めなかった。Ki-67は、上皮細胞では両群で有意差は認めなかったが、MICではβ-TCP填入群で陽性率が増加していた。なおCD68、α-SMAでは有意差は認めなかった。以上から遊離BPが減少しているβ-TCP填入群でATGに必須の因子が発現増強、遊離BPが増加しているβ-TCP非填入群でATG抑制因子が発現増強していることから、歯槽骨から遊離したBPは、抜歯窩局所のATG活性を抑制する可能性が示された。

两年前进行的一项研究中，在 BRONJ 发病模型中将 β-TCP 插入拔牙槽中，拔牙一周后切除 β-TCP 和周围肉芽组织，LC-MS/MS 分析显示，唑来膦酸验证ZA)浓度时，检测到通常在β-TCP中检测不到的ZA，与未添加β-TCP的组相比，观察到肉芽组织中的ZA浓度降低。今年，我们对两组的肉芽组织进行了蛋白质组分析，并研究了相关蛋白质。当我们排除显示显着差异的蛋白质中的非特异性上皮/肌肉组织相关蛋白时，我们发现自噬相关蛋白如Atg9a、LC-3和Rubicon的表达存在较大波动。因此，除了Atg9a、LC-3和Rubicon之外，我们还对伤口愈合标志物CD68、α-SMA和Ki-67进行了免疫组织化学染色，并随机提取了4个高倍视野来检查表达情况。状态进行比较。结果，Atg9a和LC-3在上皮细胞中不表达，但在β-TCP负载组的上皮下单核炎症细胞（MIC）中表达增强。在上皮细胞中加载 β-TCP 的组中 Rubicon 表达受到抑制。两组之间的 MIC 无显着差异。虽然两组上皮细胞Ki-67无显着差异，但β-TCP负载组MIC阳性率升高。此外，CD68和α-SMA没有观察到显着差异。由上可知，在β-TCP负载组中，ATG必需因子的表达增强，游离血压降低；在β-TCP未负载组中，ATG抑制因子的表达增强，游离血压降低。这些结果表明，牙槽骨释放的 BP 可能会抑制拔牙槽区域的 ATG 活性。