Development of antigeni modificaiton system to enhance effect of cancer vaccine

开发抗原修饰系统以增强癌症疫苗的效果

基本信息

批准号：
21H03825
负责人：
望月慎一
金额：
$ 11.4万
依托单位：
The University of Kitakyushu
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

がんワクチンは生体が自ら持つ免疫機能を活性化してがん細胞を攻撃する治療法であるが、使用されている抗原が自身由来ということもあり、その抗原性は決して高いわけではない。本研究では、がん細胞に特異的に認識される多糖を利用し、がん細胞の抗原性改変に基づく有効ながんワクチンの開発を試みる。2022年度にヒアルロン酸（HA）と抗原タンパク質のオボアルブミン（OVA）との縮合反応によりコンジュゲート体を作製し、HAの分子量の異なるもの、HAとOVAの組成が異なるコンジュゲート体を得た。CD44との結合能を水晶発振子を用いて蛍光修飾した各コンジュゲート体のがん細胞への取り込みを評価したところ、高密度なコンジュゲート体がCD44に対し非常に強い親和性を示し、細胞にもよく取り込まれた。免疫応答を評価したところ、OVA特異的CTLを含む脾細胞とコンジュゲート体処理したがん細胞を混合させたところ、培養上清中に非常に高濃度のインターフェロンガンマを検出した。これは、がん細胞がHAを介してOVAを取り込み、その一部を抗原として提示していることを示している。これより、本研究の基本概念となる外来抗原を人為的に送達させることで細胞の抗原性が変化することを証明された。また、抗原としてタンパク質ではなく、ペプチドを用いてもコンジュゲート体の作製を試みた。ヒアルロン酸のカルボキシル基にN- (6-Maleimidocaproyloxy) succinimide (EMCS)を導入し、システインを付加させた抗原ペプチドとの反応を試みた。NMRによりペプチドの量を定量したところ、HA１本あたり約8個のペプチドが結合したコンジュゲート体を得ることに成功した。

癌症疫苗是激活生物体具有和攻击癌细胞的免疫功能的治疗方法，但是由于所使用的抗原是自身衍生而来的，因此其抗原绝不是很高的。在这项研究中，我们将尝试使用由癌细胞专门识别的多糖基于癌细胞的抗原改变来开发有效的癌症疫苗。在2022年，获得了透明质酸（HA）与抗原蛋白卵巢蛋白（OVA）之间的共轭反应，从而获得了共轭形式，并获得了具有不同分子量HA的分子量和HA和OVA不同分子量的共轭物。当对使用晶体振荡器进行荧光修饰的每种结合物的结合，评估了其CD44与癌细胞中的结合能力时，高密度偶联物对CD44的亲和力非常强，并且也很好地掺入了细胞中。当评估免疫反应时，当混合了含有OVA特异性CTL的脾细胞和用共轭体处理的癌细胞时，在培养上士中检测到了非常高的干扰素伽玛。这表明癌细胞通过HA摄取OVA，并将其中一些作为抗原。这证明，人为地递送外国抗原（这是本研究的基本概念）改变了细胞的抗原性。此外，我们尝试使用肽而不是蛋白质作为抗原产生结合物。将N-（6-甲米型胶质氧氧化物）琥珀酰亚胺（EMC）引入到透明质酸的羧基中，并尝试使用添加半胱氨酸的抗原肽进行反应。通过NMR定量肽的量，并成功获得含有大约8个肽的共轭物。