新規母性因子による生殖顆粒の動態制御機構の解析

新型母体因素控制生殖颗粒动态的机制分析

基本信息

批准号：
21H02489
负责人：
中村輝
金额：
$ 11.07万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21H02489/
关键词：
生殖細胞生殖顆粒相分離ショウジョウバエ母性RNA

项目摘要

ノックダウンにより生殖細胞形成に異常をきたす母性遺伝子として、spargel (srl)を同定した。Srlは転写コアクチベーターであるPGC-1のホモログである。srl-null卵巣においてvasa mRNAの現象が観察されたことから、vasaの強制発現によりsrl-nullの異常が相補されるかを検討した。その結果、生殖質因子のヌアージへの集積は回復したが、生殖質への局在は回復しなかった。srl-null卵巣では、oskar RNAの生殖質領域への局在が低下しOskタンパク質の発現が激減していた。この異常はvasa強制発現では回復しなかった。Srlには機能未知のRNA結合ドメイン（RRM）が存在する。現在、Srlがoskar mRNAを制御している可能性を検討すべく、UAS-SrlΔRRMを作成しsrl-nullの表現型の相補性について検討する予定である。また、生殖質アッセンブリーにおけるAubergine局在を促進する因子として同定したTppについて、Tpp-APEX2ノックイン系統を作成し、近接因子標識法により相互作用因子候補を探索した。その結果、Tudorドメインを持つCG9925が同定された。EGFPノックイン系統を作成したところ、CG9925とTppがヌアージにおいて共局在していることを確認した。Tppホモログは左右相称動物で保存されており、配偶子形成過程で発現している。マウスには3つのパラログ（Gtsf1, Gtsf1l, Gtsf2）が存在する。さらに、Gtsf1lの遺伝子重複によって生じた、BC025082.1配列がZfp850の3´ UTR配列中に存在する。機能未知のGtsf1l, Gtsf2, BC025082,1について三重ノックアウト変異体（TKO）を作成した。残念ながら、TKOに異常は検出されなかった。

我们将spargel (srl)确定为母体基因，其敲低会导致生殖细胞形成异常。 Srl 是转录共激活因子 PGC-1 的同源物。由于在 srl-null 卵巢中观察到 vasa mRNA 的现象，我们研究了 vasa 的强制表达是否可以补充 srl-null 的异常。结果，种质因子在nuage中的积累得到恢复，但在种质中的定位却没有恢复。在srl缺失的卵巢中，oskar RNA在种质区域的定位减少，并且Osk蛋白的表达急剧减少。这种异常并未通过vasa的强制表达而恢复。 Srl 包含功能未知的 RNA 结合域 (RRM)。目前，为了检验Srl调节oskar mRNA的可能性，我们计划创建UAS-SrlΔRRM并检验srl-null的表型互补性。此外，对于被确定为促进茄子在种质组装中定位的因子Tpp，我们创建了Tpp-APEX2敲入菌株，并使用近端因子标记方法搜索候选相互作用因子。结果，鉴定出具有Tudor结构域的CG9925。当我们创建 EGFP 敲入菌株时，我们确认 CG9925 和 Tpp 在 nuage 中共定位。 Tpp 同源物在双侧动物中保守，并在配子发生过程中表达。小鼠体内存在三种旁系同源物（Gtsf1、Gtsf1l、Gtsf2）。此外，由 Gtsf1l 基因复制产生的 BC025082.1 序列存在于 Zfp850 的 3' UTR 序列中。针对 Gtsf1l、Gtsf2 和 BC025082,1 创建了三重敲除突变体 (TKO)，其功能未知。不幸的是，TKO并没有发现任何异常。

项目成果

期刊论文数量（10）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Inserm, Institut de Biologie Valrose/University of Montpellier(フランス)

Inserm、瓦尔罗斯生物学研究所/蒙彼利埃大学（法国）

DOI：
发表时间：
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

Coordinated repression of pro-differentiation genes via P-bodies and transcription maintains Drosophila intestinal stem cell identity.

DOI：
10.1016/j.cub.2021.11.032
发表时间：
2022-01-24
期刊：
Current biology : CB
影响因子：
0
作者：
Buddika K;Huang YT;Ariyapala IS;Butrum-Griffith A;Norrell SA;O'Connor AM;Patel VK;Rector SA;Slovan M;Sokolowski M;Kato Y;Nakamura A;Sokol NS
通讯作者：
Sokol NS

Tpp, a novel nuage component, facilitates posterior localization of Aubergine during Drosophila oogenesis

Tpp 是一种新型 nuage 成分，有助于果蝇卵子发生过程中茄子的后部定位