全脳虚血後海馬グリア細胞におけるTGF-β1/Smadシグナルの機能的意義の解明

全脑缺血后海马胶质细胞TGF-β1/Smad信号的功能意义阐明

基本信息

批准号：
21K08927
负责人：
中島崇行
金额：
$ 2.33万
依托单位：
Osaka Metropolitan University (2022)Osaka Prefecture University (2021)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K08927/
关键词：
TGF-beta アストロサイトミクログリア海馬全脳虚血 Smad TGF-β グリア細胞

项目摘要

今年度はin vitro虚血模擬実験系でのグリア細胞における細胞増殖および貪食能について調べた。具体的にはニューロンーグリア共培養細胞に酸素/グルコース除去（OGD）処置を負荷することによって神経細胞を死滅させ、その培養上清を別に用意した混合グリア細胞に添加した。コントロール実験として、OGD未負荷のニューロンーグリア共培養細胞の上清を混合グリア細胞に添加した。細胞増殖は、OGD負荷ニューロン-グリア共培養細胞由来の上清をグリア細胞に添加してから１日後にMTTアッセイによって評価した。すると、OGD負荷培養細胞由来上清添加を受けたグリア細胞では、コントロールグリア細胞よりもMTTアッセイの測定値が高くなり、OGD負荷培養細胞由来上清にグリア細胞増殖誘導効果があると思われた。OGD負荷培養細胞由来上清によって誘導されるグリア細胞増殖へのTGF-β1（10mg/ml）の影響を調べたところ、TGF-β1はOGD負荷培養細胞由来上清誘導性のグリア細胞増殖を変化させなかった。TGF-β1（10mg/ml）はその下流シグナルであるSmadをリン酸化させる効果を有していた。一方、OGD負荷培養細胞由来上清誘導性のグリア細胞増殖へのTGF-βシグナル阻害剤であるSB525334（10mg/ml）あるいはP144の影響を調べたところ、いずれの薬剤もグリア細胞を減少させる効果を発揮した。SB525334およびP144によるグリア細胞減少効果はOGD負荷ニューロン-グリア共培養細胞由来上清添加の有無にかかわらず認められた。これらの結果はTGF-βシグナルがグリア細胞の生存に必要な因子であることを示唆する。貪食能についてはOGD負荷培養細胞由来の上清をグリア細胞に添加してから１日後に蛍光ビーズ取り込み能によって評価した。その結果、OGD負荷培養細胞由来上清は蛍光ビーズ取り込み能を変化させなかった。

今年，我们在体外缺血模拟系统中研究了神经胶质细胞的细胞增殖和吞噬作用。具体地，对神经元-神经胶质细胞共培养细胞进行氧/葡萄糖剥夺(OGD)处理以杀死神经元，并将培养物上清液添加到单独制备的混合神经胶质细胞中。作为对照实验，将没有 OGD 负载的神经元-胶质细胞共培养细胞的上清液添加到混合的胶质细胞中。将负载 OGD 的神经元-神经胶质共培养细胞的上清液添加到神经胶质细胞一天后，通过 MTT 测定评估细胞增殖。结果，补充了负载OGD的培养细胞来源的上清液的神经胶质细胞的MTT测定值高于对照神经胶质细胞，表明负载OGD的培养细胞来源的上清液具有诱导神经胶质细胞增殖的作用.我们研究了 TGF-β1 (10 mg/ml) 对负载 OGD 的培养细胞上清液诱导的神经胶质细胞增殖的影响，发现 TGF-β1 改变了负载 OGD 的培养细胞上清液诱导的神经胶质细胞增殖。不要让它。 TGF-β1 (10mg/ml)具有磷酸化Smad的作用，Smad是TGF-β1的下游信号。另一方面，当我们研究 TGF-β 信号抑制剂 SB525334 (10 mg/ml) 或 P144 对来自 OGD 负载培养细胞的上清诱导的神经胶质细胞增殖的影响时，我们发现这两种药物都具有减少神经胶质细胞。无论是否存在源自负载OGD的神经元-胶质细胞共培养细胞的上清液，都观察到SB525334和P144的神经胶质细胞减少作用。这些结果表明TGF-β信号传导是神经胶质细胞存活的必要因素。将来自负载OGD的培养细胞的上清液添加至神经胶质细胞一天后，通过荧光珠摄取能力评估吞噬作用。结果，来自负载OGD的培养细胞的上清液没有改变荧光珠摄取能力。