心停止肝に対する、酸素化灌流とMuse細胞移植を融合した臓器修復再生法の開発

氧灌注与Muse细胞移植相结合的心脏骤停肝脏器官修复再生方法的建立

• 批准号: 21K08636
• 负责人: 宮城 重人
• 金额: $ 2.5万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K08636/
• 关键词: Muse細胞; 過小グラフト; 心停止ドナーグラフト; 酸素化灌流; 類洞微小循環

正常肝のラット20％過小グラフト移植モデルを作成し、こちらにヒトMuse 細胞および間葉系幹細胞（MSC)のブースト細胞移植モデルを付加する研究を継続した。ブースト移植細胞数を、MSC40万個、Muse40万個、MSC500万個（MSC500万個中にMuse40万が存在すると想定できる）で比較検討を継続した。過小グラフト肝移植＋ブースト細胞移植のモデルは既に当科で確立されているため、生存率には有意差が出なかったのは報告済である。しかし肝再生速度と肝代謝能力（ICG検査）の検討にてMuse40万個移植群は他群に比し有意にICG消失率が良好であった。ICG検査が、MSC500万群で改善が不十分なのにMuseだけ改善した理由として、肝臓内の血流が改善した可能性を考え（MSC500万群では細胞数が多すぎてかえって類洞閉塞した可能性を考えた）、臓器透明化技術を用いて肝類洞画像を撮影した。術後3日目のラットに蛍光標識デキストランを注射し、肝臓を摘出後、4%PFAにて浸漬固定。そのごCUBIC protocolを用い肝臓を透明化し多光子共焦点レーザー顕微鏡にて3次元類洞画像を撮影。ImageJによる連続した平均類洞体積・表面積測定にて、類洞の開存性および連続性がMuse細胞40万投与でMSCに比し有意に改善していることが解った。さらに、Muse細胞はMSCと比較してHGF、VEGFAを高発現していることが新たに分かった。このためMuse細胞の類洞保護効果がHGFやVEGFAによるものと想定できた。心停止ドナー肝グラフトに酸素化灌流を施行する類洞保護モデルもラットとブタで確立した。ラットにて心停止ドナー無処置再灌流群と酸素化後の再灌流群で比較研究を開始した。また酸素化後の再灌流時に細胞ブーストを行う実験モデルも確立した。

我们创建了大鼠正常肝脏 20% 尺寸过小的移植物移植模型，并通过在该模型中添加人类 Muse 细胞和间充质干细胞 (MSC) 的增强细胞移植模型来继续我们的研究。继续对加强的移植细胞数量进行比较研究：400,000个MSC、400,000个Muse和500万个MSC（可以假设500万个MSC中存在400,000个Muse）。由于我科已经建立了小体积肝移植+加强细胞移植的模式，据报道存活率无明显差异。然而，在检查肝脏再生率和肝脏代谢能力（ICG测试）时，移植400,000 Muse的组的ICG消失率明显好于其他组。之所以在ICG测试中只有Muse有改善，而500万MSC组改善不足，是因为肝脏的血流可能有所改善（500万MSC组中，细胞数量可能过高，导致肝窦阻塞），使用器官透明技术拍摄肝窦图像。术后第3天给大鼠注射荧光标记的右旋糖酐，取出肝脏并浸泡在4% PFA中固定。使用 CUBIC 方案使肝脏透明，并使用多光子共焦激光显微镜拍摄三维正弦图像。使用 ImageJ 进行的连续平均正弦曲线体积和表面积测量表明，与 MSC 相比，经过 400,000 剂 Muse 细胞后，正弦曲线的通畅性和连续性显着改善。此外，新发现Muse细胞比MSCs表达更高水平的HGF和VEGFA。因此，推测Muse细胞的正弦保护作用是由于HGF和VEGFA。还在大鼠和猪中建立了对心脏骤停供肝移植物进行氧合灌注的正弦保护模型。我们在大鼠心脏骤停供体再灌注组和氧合后再灌注组之间开始了一项比较研究。我们还建立了一个实验模型，其中细胞在氧合后的再灌注过程中得到增强。

项目成果

局所進行肝門部領域胆管癌に対する 肝移植の適応と生体移植用治療戦略

局部晚期肝门部胆管癌肝移植适应证及活体移植治疗策略

• 发表时间: 2022
• 作者: 宮城重人;藤尾淳;戸子台和哲;柏舘俊明;宮澤恒持;佐々木健吾;松村宗幸;宮崎勇希;山名浩樹;青木修一;中川圭;森川孝則 亀井尚;海野倫明
• 通讯作者: 海野倫明

The first report of a Japanese clinical trial for oxygenated hypothermic machine perfusion on for kidney transplantation from donors after cardiac death.

日本第一份临床试验报告，用于心脏死亡后供体肾移植的氧合低温机灌注。

• 发表时间: 2021
• 作者: Shigehito Miyagi1; Toshiaki Kashiwadate1; Hiroyasu Nishimaki1; Kazuaki Tokodai1; Wataru Nakanishi1; Ryuichi Nishimura1; Atsushi Fujio1; Kengo Sasaki1; Michiaki Unno1; Takashi Kamei1;Naoto Matsuno2
• 通讯作者: Naoto Matsuno2

局所進行肝門部領域胆管癌に対する 肝移植の適応と生体移植用治療戦略

局部晚期肝门部胆管癌肝移植适应证及活体移植治疗策略

• 发表时间: 2022
• 作者: 宮城重人;藤尾淳;戸子台和哲;柏舘俊明;宮澤恒持;佐々木健吾;松村宗幸;宮崎勇希;山名浩樹;青木修一;中川圭;森川孝則 亀井尚;海野倫明
• 通讯作者: 海野倫明

Protection of liver sinusoids by intravenous administration of human Muse cells in a rat extra‐small partial liver transplantation model

静脉注射人Muse细胞对大鼠超小部分肝移植模型的肝窦保护作用

• DOI: 10.1111/ajt.16461
• 发表时间: 2021
• 影响因子: 8.8
• 作者: Shono Yoshihiro;Kushida Yoshihiro;Wakao Shohei;Kuroda Yasumasa;Unno Michiaki;Kamei Takashi;Miyagi Shigehito;Dezawa Mari
• 通讯作者: Dezawa Mari

Protection of liver sinusoids by intravenous administration of human Muse cells in a rat extra‐small partial liver transplantation model

静脉注射人Muse细胞对大鼠超小部分肝移植模型的肝窦保护作用

• DOI: 10.1111/ajt.16461
• 发表时间: 2020-12-22
• 期刊: American Journal of Transplantation
• 影响因子: 8.8
• 作者: Yoshihiro Shono;Yoshihiro Kushida;Shohei Wakao;Yasumasa Kuroda;M. Unno;T. Kamei;S. Miyagi;M. Dezawa
• 通讯作者: M. Dezawa