新規破骨細胞形成促進因子Angiogeninが口腔癌骨浸潤に果たす役割の解明

阐明新型破骨细胞形成促进因子血管生成素在口腔癌骨侵袭中的作用

基本信息

批准号：
20K10137
负责人：
伊原木聰一郎
金额：
$ 2.83万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K10137/
关键词：
Angiogenin 口腔癌骨浸潤

项目摘要

BALB/C系nu/nuヌードマウスの大腿骨骨髄腔内に口腔癌細胞HSC-2を移植し，口腔癌骨浸潤動物モデルを確立した．各種口腔癌細胞株を移植し，浸潤面積をImageJで計測し，骨浸潤を評価した．shRNAを用いて口腔癌細胞のANG発現を抑制し，骨浸潤の抑制効果を調べた．対照群では骨髄内に腫瘍増殖を認め，TRAP染色で腫瘍周囲の骨面に沿って多数の破骨細胞形成と骨吸収窩の形成が認められた．一方shRNA群では腫瘍増殖が抑制され、TRAP染色で破骨細胞形成も抑制されていた．ANGが破骨細胞形成に与える影響の解析を行った．マウス大腿骨から骨髄細胞を回収し，Macrophage colony-stimulating factor（M-CSF）とANGを添加し培養後，TRAP染色を行い，破骨細胞数を計測した．ANGにより破骨細胞形成が促進されることを確認した．野生型およびANG KOマウスから、それぞれ採取した頭蓋骨由来骨芽細胞と脾臓由来破骨細胞前駆細胞の共存培養を行った.破骨細胞前駆細胞におけるANG遺伝子の欠損は，破骨細胞形成を阻害した．破骨細胞の骨吸収能はPit formation assayで評価した．ANG遺伝子の阻害は，破骨細胞の骨吸収能を阻害した．ANGが口腔癌細胞に与える影響の解析を行った．口腔癌細胞のANGおよびPlexinB2発現はELISA法とWestern blot法で調べた．口腔癌細胞をANG 存在下と非存在下で培養し増殖能と浸潤能の解析を行った.口腔癌細胞のANGおよびPlexinB2を発現しており、ANGは口腔癌細胞の増殖能と浸潤能を促進することが明らかとなった．

口服癌细胞HSC-2植入BALB/C NU/NU裸鼠的股骨骨髓腔中，并建立了口腔癌骨侵袭的动物模型。植入了各种口腔癌细胞系，并使用ImageJ测量浸润区域以评估骨骼侵袭。我们使用SHRNA抑制口腔癌细胞中的ANG表达，并研究了骨侵袭的抑制作用。在对照组中，在骨髓中观察到肿瘤的生长，陷阱染色显示沿肿瘤周围的骨表面形成了许多破骨细胞形成和骨吸收窝的形成。另一方面，shRNA组抑制了肿瘤的生长和破骨细胞的形成也被陷阱染色抑制。我们分析了ANG对破骨细胞形成的影响。从小鼠股骨中收集骨髓细胞，并在添加巨噬细胞刺激因子（M-CSF）和ANG后，进行陷阱染色以测量破骨细胞的数量。已确认ANG促进了破骨细胞的形成。分别从野生型和Ang Ko小鼠进行了颅骨衍生的成骨细胞和脾脏衍生的骨细胞前体的共同培养。破骨细胞前体中ANG基因的缺陷抑制破骨细胞的形成。使用凹坑形成测定法评估破骨细胞的骨吸收能力。抑制ANG基因抑制破骨细胞的骨吸收能力。我们分析了ANG对口腔癌细胞的影响。使用ELISA方法和Western印迹法研究了ANG和PLEXINB2在口腔癌细胞中的表达。在存在和不存在ANG的情况下培养口腔癌细胞以分析其增殖和侵入性潜力。他们表达了口腔癌细胞的ANG和PLEXINB2，并且揭示了ANG促进口腔癌细胞的增殖和侵入性潜力。