腫瘍免疫の再活性化を可能にする悪性グリオーマ分子標的治療薬の開発

开发能够重新激活肿瘤免疫的恶性胶质瘤分子靶向治疗药物

基本信息

批准号：
20K09333
负责人：
高橋寿明
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Hokuriku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K09333/
关键词：
グリオーマ腫瘍免疫 Oct-3/4 TDO IDO 細胞周期 cdc2 分子標的治療薬

グリオーマ腫瘍免疫 Oct-3/4 TDO IDO 細胞周期 cdc2 分子標的治療薬

项目摘要

本研究は我々がグリオーマ悪性化のマスター分子と考えるOct-3/4の発現を抑制する化合物でありながら抗腫瘍免疫に関わるトリプトファン代謝酵素の発現をも抑制する「トリプル抑制化合物」を新規グリオーマ治療薬として見出すことである。これまでにOct-3/4、TDO、IDOの各遺伝子プロモーター下でルシフェラーゼを発現するヒト膠芽腫T98G細胞を用いた化合物ライブラリー（640種）スクリーニングにより、候補化合物24種（D2受容体遮断薬（6）、H1受容体遮断薬（3）、抗悪性腫瘍薬（3）、Ca拮抗薬（3）を含む24種）を得ていた。化合物の評価には正常マウス脳へのグリオーマ細胞移植モデルを用いて腫瘍免疫再活性化を評価する必要がある。そのことを考慮し、二次スクリーニングはマウスのグリオーマ細胞であるGL261細胞を用いて二次スクリーニングを実施した。細胞増殖能について検討したところ、化合物F（仮名）は他の化合物に比べて細胞増殖抑制作用が顕著でありながら、細胞傷害性が低かった。フローサイトメーターを用いた細胞周期解析によりG2/M期停止が認められた。そこでG2/M期の進行に必要なcdc2/サイクリンB複合体の解析を行ったところ、cdc2/サイクリンB複合体の活性化を抑制する15番目のチロシン（Y15）のリン酸化が亢進していることが判明した。しかも、化合物Fは正常アストロサイトの細胞増殖は抑制しないことから、化合物FによるGL261細胞の増殖抑制効果はグリオーマに特異的な可能性が高い。一方で、Oct-3/4、TDO、IDOの発現抑制は他の化合物の方が強かった。現在、C57BL/6マウスの脳内にGL261細胞を移植し、同種グリオーマ細胞移植モデルを作製している。モデルが出来次第、各種化合物の投与実験を開始する予定である。

这项研究将作为一种新型神经胶质瘤治疗剂，即抑制OCT-3/4表达的“三重抑制性化合物”，我们认为这是胶质瘤恶性肿瘤的主要分子，但也抑制了色氨酸代谢酶的表达。到目前为止，使用人胶质母细胞瘤T98G细胞筛选了24种候选化合物（包括D2受体阻滞剂（640种），在Oct-3/4下表达荧光素酶，TDO和IDO基因启动子和24种（包括D2受体阻滞剂）（6），H1受体阻滞剂（3），抗杀伤剂（3）和Ca andists（3），筛选了24种。对化合物的评估需要使用神经胶质瘤细胞植入模型评估肿瘤免疫再活化，使其成为正常的小鼠大脑。考虑到这一点，使用GL261细胞（来自小鼠的神经胶质瘤细胞）进行次级筛查。当检查细胞增殖能力时，化合物F（化名）表明，与其他化合物相比，它具有显着的细胞增殖作用，但细胞毒性较小。使用流式细胞仪的细胞周期分析显示G2/m相阻滞。因此，我们分析了Cdc2/Cyclin B复合物，这对于G2/M期的进展是必不可少的，发现第15酪氨酸（Y15）的磷酸化抑制了Cdc2/Cyclin b络合物的激活。此外，由于化合物F不会抑制正常星形胶质细胞的细胞增殖，因此化合物F的作用可能抑制GL261细胞特异性的胶质瘤。另一方面，其他化合物在抑制Oct-3/4，TDO和IDO的表达方面更有效。目前，将GL261细胞移植到C57BL/6小鼠的大脑中，以创建同种异体神经胶质瘤细胞移植模型。模型完成后，我们计划开始使用各种化合物进行管理实验。