３次元培養を用いたYAP代謝プロファイルの研究

使用 3D 培养研究 YAP 代谢谱

• 批准号: 20K08862
• 负责人: 古元 礼子
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Yamaguchi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K08862/
• 关键词: Hippo経路; 代謝; ３次元培養; 遺伝子発現

本研究課題では、Hippo経路とその鍵分子YAP/TAZによるエネルギー代謝制御について、３次元細胞培養系を用いた研究を行う。Hippo経路は発生期において、形態形成、多分化能獲得、およびstemness（幹細胞らしさ）に関わり、組織の再生や発生過程で重要で①器官の大きさや発がんを抑制、②細胞間接着や細胞骨格刺激に応答し、細胞接着阻害や上皮間葉転換（EMT）に関与、③幹細胞の未分化能の維持、④細胞数や張力に応答、等の役割が知られている。通常の２次元培養では細胞は平面的に増殖しHippo経路は抑制されており、転写共役因子YAP/TAZは著しく活性化している。そのため、YAP/TAZの生理的な役割の解析には３次元培養系が必須である。そこで、本研究では３次元培養系による網羅的遺伝子発現解析結果に基づき、これまでの２次元培養では明らかにできなかったエネルギー代謝、コレステロール・脂質代謝等におけるYAPネットワークの全容を解明する。今年度は、前年度同様に各種細胞３次元培養系でのRNAseqの解析を行った。特に皮膚細胞に刺激を加えた場合の遺伝子発現パターンの変化を解析した。解析方法は、Gene Ontology解析のGESA（Gene Set Enrichment Analysis）およびDAVIDによるシグナル経路の拾い上げと既知のYAP/TAZ標的遺伝子の発現の変化を調べた。また、昨年度同様に代謝活性測定実験にも着手し、まずは３次元培養系でのATP活性測定を継続している。RPE1細胞およびHaCaT細胞のスフェロイドを作製し、細胞数、スフェロイドの形成後の時間経過によってATP活性がどのように変化するかを調べ、条件設定を行った。細胞の遺伝子変異の影響や各種刺激によるATP活性の変化の解析を実施中である。

在这项研究中，我们将使用hippo路线上的三维细胞培养以及YAP/TAZ的能量代谢控制进行研究。在发生时期，河马途径与形成形成，可能是形成的形成，在干性（茎窖性）中，对组织的再生和发生的过程很重要，（1）抑制了抑制的大小和癌症器官（2）细胞粘附和细胞骨骼刺激。 。在正常的两个维​​培养物中，细胞会平坦生长，河马路线被抑制，转录教练YAP/TAZ的转移显着活跃。因此，需要三维培养系统来分析YAP/TAZ的生理作用。因此，在这项研究中，能量代谢，胆固醇，脂质代谢等中的整个YAP网络在前两个维培养中并不明显，这是基于三维遗传表达分析的结果培养系统，阐明了胆固醇，脂质代谢等的整个YAP网络。今年，我们像去年一样分析了各种3D培养系统中的RNASEQ。特别是，分析对皮肤细胞刺激的基因表达模式的变化。检查了分析方法，以通过GESA（基因集富集分析）和David进行基因本体分析来拾取信号途径，并改变已知的YAP/TAZ靶向基因的表达。此外，与同年一样，启动了代谢活性测量实验，并在3D培养系统中继续进行ATP活性测量。产生了RPE1细胞和HACAT细胞的包裹，研究了ATP活性如何根据细胞的数量和舒适性形成时间而变化，并设置条件。我们正在实施细胞基因突变的影响以及由于各种刺激而导致的ATP活性变化。

项目成果

小児ラブドイド腫瘍の全ゲノムトランスポゾンプロファイリング

儿科横纹肌瘤的全基因组转座子分析

• 发表时间: 2020
• 作者: Amano S;Suenaga S;Hamamoto K;Yada S;Tsuyama T;Shinoda S;Tanaka Y;Takemoto Y;Harada E;Tanabe K;Asahara S;Hoshii K;Takami T.;泉川公一;早野崇英
• 通讯作者: 早野崇英

ノギンタンパク質を分泌する細胞およびそれを用いたオルガノイドの作製方法

分泌Noggin蛋白的细胞以及使用它们生产类器官的方法

• 发表时间: 2021