３次元培養を用いたYAP代謝プロファイルの研究

使用 3D 培养研究 YAP 代谢谱

• 批准号: 20K08862
• 负责人: 古元 礼子
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Yamaguchi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K08862/
• 关键词: Hippo経路; 代謝; ３次元培養; 遺伝子発現

本研究課題では、Hippo経路とその鍵分子YAP/TAZによるエネルギー代謝制御について、３次元細胞培養系を用いた研究を行う。Hippo経路は発生期において、形態形成、多分化能獲得、およびstemness（幹細胞らしさ）に関わり、組織の再生や発生過程で重要で①器官の大きさや発がんを抑制、②細胞間接着や細胞骨格刺激に応答し、細胞接着阻害や上皮間葉転換（EMT）に関与、③幹細胞の未分化能の維持、④細胞数や張力に応答、等の役割が知られている。通常の２次元培養では細胞は平面的に増殖しHippo経路は抑制されており、転写共役因子YAP/TAZは著しく活性化している。そのため、YAP/TAZの生理的な役割の解析には３次元培養系が必須である。そこで、本研究では３次元培養系による網羅的遺伝子発現解析結果に基づき、これまでの２次元培養では明らかにできなかったエネルギー代謝、コレステロール・脂質代謝等におけるYAPネットワークの全容を解明する。今年度は、前年度同様に各種細胞３次元培養系でのRNAseqの解析を行った。特に皮膚細胞に刺激を加えた場合の遺伝子発現パターンの変化を解析した。解析方法は、Gene Ontology解析のGESA（Gene Set Enrichment Analysis）およびDAVIDによるシグナル経路の拾い上げと既知のYAP/TAZ標的遺伝子の発現の変化を調べた。また、昨年度同様に代謝活性測定実験にも着手し、まずは３次元培養系でのATP活性測定を継続している。RPE1細胞およびHaCaT細胞のスフェロイドを作製し、細胞数、スフェロイドの形成後の時間経過によってATP活性がどのように変化するかを調べ、条件設定を行った。細胞の遺伝子変異の影響や各種刺激によるATP活性の変化の解析を実施中である。

在本研究主题中，我们将使用三维细胞培养系统对河马途径及其关键分子YAP/TAZ对能量代谢的控制进行研究。河马途径参与了新生阶段的形态发生，多能性和干细胞身份（干细胞身份），并且在组织再生和发育过程中很重要。它具有已知的作用，例如：1）抑制器官的大小和癌变，2）对细胞 - 细胞粘附和细胞骨架刺激的反应，以及抑制细胞粘附和上皮 - 间质转换（EMT），3）保持干细胞的未分化潜力，4）对细胞计数响应，4）4）对细胞计数响应。在正常的二维培养物中，细胞生长平坦，河马途径被抑制，转录时装因子YAP/TAZ被显着激活。因此，三维培养系统对于分析YAP/TAZ的生理作用至关重要。因此，这项研究将基于使用三维培养系统的综合基因表达分析结果的结果，在能量代谢，胆固醇和脂质代谢等中阐明YAP网络在能量代谢，胆固醇和脂质代谢等方面的全部程度。今年，与上一年一样，RNASEQ在各种细胞3D培养系统中进行了分析。特别是，分析了刺激皮肤细胞时基因表达模式的变化。分析方法是在基因本体分析中通过基因集富集分析（GESA）和David研究信号途径的拾取，以及已知YAP/TAZ靶基因表达的变化。此外，与去年一样，他们开始进行代谢活性测量的实验，并首先继续测量三维培养系统中的ATP活性。制备了用于RPE1和HACAT细胞的球体，并设置了条件以确定ATP活性如何根据细胞数量和球形形成后的时间过程而变化。我们目前正在对细胞基因突变的影响以及由于各种刺激引起的ATP活性变化的分析。

项目成果

小児ラブドイド腫瘍の全ゲノムトランスポゾンプロファイリング

儿科横纹肌瘤的全基因组转座子分析

• 发表时间: 2020
• 作者: Amano S;Suenaga S;Hamamoto K;Yada S;Tsuyama T;Shinoda S;Tanaka Y;Takemoto Y;Harada E;Tanabe K;Asahara S;Hoshii K;Takami T.;泉川公一;早野崇英
• 通讯作者: 早野崇英

ノギンタンパク質を分泌する細胞およびそれを用いたオルガノイドの作製方法

分泌Noggin蛋白的细胞以及使用它们生产类器官的方法

• 发表时间: 2021