Forward genetic identification of new players in vitamin D signaling.

维生素 D 信号传导新参与者的正向遗传鉴定。

• 批准号: 21K06950
• 负责人: 杉本 幸太郎
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Fukushima Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K06950/
• 关键词: 核内受容体; ビタミンD; がん; CRISPRライブラリ; 順遺伝学; ゲノム編集

ビタミンDシグナルは骨代謝のみならず腫瘍発生など様々な生命現象に関与している。同シグナルの作用は主にビタミンD受容体(VDR)など核内受容体(NR)に属する転写因子を介した下流標的遺伝子の転写制御である。NRは特異リガンドのみならず様々な内因性蛋白質によって活性が調節されているが、これまでの創薬研究はリガンドの同定や新規合成に偏っており、内因性蛋白質を対象とするものは少ない。最近我々は最近細胞接着を基点とする一連のシグナルカスケードが、NRのセリン・リン酸化を介してリガンド感受性を著しく亢進させることを報告した。これはキナーゼを標的としてビタミンDシグナルを制御するという新たな治療戦略の可能性を示唆する。そこで本研究では順遺伝学的アプローチによりビタミンDシグナル関連蛋白質を網羅的に同定しようと試みた。まずビタミンDシグナルの蛍光レポーターを恒常発現する細胞株を樹立し、次に全遺伝子に対すプール化されたCRISPR-gRNA発現ベクターを導入する。これらの細胞にビタミンDを低濃度と高濃度で処理し、セルソーターで蛍光強度を測定する。低用量のビタミンDでレポーター活性の高いものを抽出すれば、これにはビタミンDシグナルを負に制御する遺伝子群を機能欠失した細胞群が含まれているはずで、逆もまた真である。この細胞群からゲノミックDNAを回収し取り込まれたsgRNA配列を次世代シークエンシングによって解析することで、ビタミンDシグナルを正負に制御する遺伝子群を網羅的に同定する。以上の研究計画のうち、本研究期間では上記のうちレポーター系の構築、選定、ならびに最適化を実施した。またgRNAライブラリの準備とトランスフェクションの最適化、および細胞のソーティングまで完了している。

维生素 D 信号不仅参与骨代谢，还参与肿瘤发育等多种生物现象。该信号的作用主要是通过维生素D受体（VDR）等属于核受体（NR）的转录因子来调节下游靶基因的转录。 NR的活性不仅受到特定配体的调节，还受到各种内源蛋白的调节，但迄今为止的药物发现研究偏向于配体的鉴定和新的合成，很少有研究针对内源蛋白。我们最近报道，源自细胞粘附的一系列信号级联通过 NR 的丝氨酸磷酸化显着增强配体敏感性。这表明有可能开发出一种新的治疗策略，以激酶为靶点来控制维生素 D 信号。因此，在本研究中，我们尝试使用正向遗传方法全面鉴定维生素 D 信号相关蛋白。首先，建立组成型表达维生素 D 信号荧光报告基因的细胞系，然后引入所有基因的 CRISPR-gRNA 表达载体。这些细胞用低浓度和高浓度的维生素 D 处理，并使用细胞分选仪测量荧光强度。如果我们使用低剂量的维生素 D 提取具有高报告活性的细胞，那么这应该包含一组具有负向调节维生素 D 信号的基因功能缺失的细胞，反之亦然。通过从该细胞群中收集基因组 DNA 并使用新一代测序分析整合的 sgRNA 序列，我们将全面鉴定一组正向和负向控制维生素 D 信号的基因。在上述研究计划中，本研究期间我们构建、选择并优化了报告系统。此外，gRNA文库制备、转染优化和细胞分选也已完成。

项目成果

Claudin-4-adhesion signaling drives breast cancer metabolism and progression via liver X receptor β

Claudin-4-粘附信号通过肝脏 X 受体 β 驱动乳腺癌代谢和进展

• DOI: 10.1186/s13058-023-01646-z
• 发表时间: 2023
• 影响因子: 7.4
• 作者: Murakami;Sugimoto Kotaro;Kobayashi Makoto;Tachibana Kazunoshin;Kojima Manabu;Okano Maiko;Hashimoto Yuko;Saji Shigehira;Ohtake Tohru;Chiba Hideki
• 通讯作者: Chiba Hideki

Regulatory T cells regulate blastemal proliferation during zebrafish caudal fin regeneration

调节性 T 细胞在斑马鱼尾鳍再生过程中调节胚芽增殖

• DOI: 10.3389/fimmu.2022.981000
• 发表时间: 2022
• 影响因子: 7.3
• 作者: Hui Subhra P.;Sugimoto Kotaro;Sheng Delicia Z.;Kikuchi Kazu
• 通讯作者: Kikuchi Kazu

The claudin?transcription factor signaling pathway

密蛋白转录因子信号通路

• DOI: 10.1080/21688370.2021.1908109
• 发表时间: 2021
• 影响因子: 3.1
• 作者: Sugimoto Kotaro;Chiba Hideki
• 通讯作者: Chiba Hideki

Paraneoplastic anti-N-methyl-D-aspartate receptor encephalitis associated with small cell lung cancer and cytotoxic T-cell-mediated pathology: Case report

与小细胞肺癌和细胞毒性 T 细胞介导的病理相关的副肿瘤性抗 N-甲基-D-天冬氨酸受体脑炎：病例报告

• DOI: 10.3389/fimmu.2022.952868
• 发表时间: 2022
• 影响因子: 7.3
• 作者: Akanuma Haruna;Iizuka Takahiro;Abe Dan;Yoshida Kenji;Matsuda Nozomu;Sugimoto Kotaro;Hashimoto Yuko;Kanai Kazuaki
• 通讯作者: Kanai Kazuaki

Alloantigen-activated (AAA) CD4 + T cells reinvigorate host endogenous T cell immunity to eliminate pre-established tumors in mice.

同种抗原激活 (AAA) CD4 T 细胞可重振宿主内源性 T 细胞免疫，消除小鼠体内预先形成的肿瘤。

• DOI: 10.1186/s13046-021-02102-6
• 发表时间: 2021-10-08
• 作者: Mochizuki K;Kobayashi S;Takahashi N;Sugimoto K;Sano H;Ohara Y;Mineishi S;Zhang Y;Kikuta A
• 通讯作者: Kikuta A