肝細胞癌の分子標的治療と概日時計の関連

肝细胞癌分子靶向治疗与生物钟的关系

基本信息

批准号：
20K08312
负责人：
阿久津典之
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Sapporo Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K08312/
关键词：
時計遺伝子肝細胞癌

项目摘要

1. ヒト肝細胞癌における時計遺伝子発現の検討：肝細胞癌10症例の癌部および非癌部の組織よりRNAを作成しcDNAを合成。その後Comparative CT法を用いて相対的発現を解析した。Clock, Bmal1, Per1,Per2 Cry1の発現を癌部と非癌部で解析したところ、Per1およびPer2が癌部と非癌部で有意な発現の違いをあることが分かった。背景因子での違いがないかさらなる検討を行っている。2. 正常肝細胞および肝癌細胞株における時計遺伝子発現と炎症性サイトカインに対する反応：肝癌細胞株HepG2, Hep3B, HLE, HLF, HuH7, PLC/PRF/5のcDNAを用いて、Clock, Bmal1, Per1,Per2 Cry1の発現を解析し、細胞株間での発現に差があることがわかり、Per1やPer2の発現が低い細胞株と、高い細胞株を用いて、種々の炎症性サイトカイン(IL-1β, IL-4, IL-13, TNF-α, IFN-γ, IL-10, TGF-β)の添加を行い、RNAおよびタンパクを回収。時計遺伝子の変化を解析している。3. 分子標的薬の正常肝細胞および肝癌細胞株における時計遺伝子の発現と炎症性サイトカインに対する反応：肝癌細胞株 (Hep3B, HLF, HuH7)にレンバチニブ1μMを投与し、37°Cで48時間培養した後に、時計遺伝子Bmal1、Rev-erbα、Rev-erbβ、Per1、Per2、 Cry1の発現についてqPCR法、western blotting法を用い検討した4，C57/BL6Jマウスを用い、抗癌剤投与の時間を変化し投与することにより概日時計の変化の検討：12時間毎の明暗群、24時間毎の明暗群に分けて、さらにそれぞれ明暗を切り替えた4群を準備。レンバチニブ10mg/kgを明で投与する群と、暗で投与する群に分けてチューブを用いて14日間経口投与し屠殺させ、肝臓における時計遺伝子の発現をqPCR 法、western　blotting法で評価した。また、マウスの大腸より腸内細菌を分離し、各群の腸内細菌叢プロファイルの変化を検討した。

1。在人肝细胞癌中检查时钟基因表达：RNA是由10例肝细胞癌和cDNA的癌性和非癌性区域的组织产生的。然后使用比较CT方法分析相对表达。在癌症和非癌性区域分析CRY1时，时钟，BMAL1，PER1，PER2，发现PER1和PER2在癌症和非癌性区域之间的表达差异显着差异。正在进行进一步的检查以确保背景因素没有差异。 2。在正常的肝细胞和肝癌细胞系中，时钟基因的表达和对炎症细胞因子的反应：时钟，BMAL1，PER1和PER2 CRY1表达在肝癌细胞系HEPG2，HEP3B，HEP3B，HE，HLE，HLE，HLE，HLF，HLF，PLC，PLC/PRF/PRF/PRF/5和该细胞之间的cDNA中分析。使用PER1和PER2低表达以及高表达的细胞系，添加了各种炎症细胞因子（IL-1β，IL-4，IL-13，TNF-α，IFN-γ，IL-10，TGF-β）以恢复RNA和蛋白质。它分析了时钟基因的变化。 3。在正常肝细胞和分子靶药物的肝癌细胞系中的表达和对炎症细胞因子的反应：在1μmlenvatinib施用对肝癌细胞系（HEP3B，HLF，HUH7）施用，在37°C下培养了48°C的permb be-evers Bmmal1，reverb bmmal1使用QPCR和Western印迹方法对PER2和CRY1进行了检查，并管理抗癌药给药的时间，检查了昼夜节律时钟的变化：每12小时分为光明和黑暗的片段，每24小时每24小时亮黑组，然后将四个组组成，然后用光和黑暗的小组在光和黑暗的组之间进行轻度和黑暗的组制备。将该组分为光线中的lenvatinib 10 mg/kg的基团，并用深色给药，并使用管子口服14天口服该组，并使用qPCR和Western印迹方法评估了肝脏中时钟基因的表达。另外，从小鼠的大肠中分离出肠道细菌，并检查了每组肠菌群谱的变化。