Phactr1遺伝子変異を背景とするウエスト症候群の分子病態メカニズムの解明

Phactr1基因突变所致West综合征分子病理机制的阐明

• 批准号: 20K08200
• 负责人: 浜田 奈々子
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Institute for Developmental Research Aichi Developmental Disability Center
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K08200/
• 关键词: PHACTR1; ウエスト症候群; Phactr1; phactr1; てんかん; PHACTR1; ウエスト症候群; Phactr1; phactr1; てんかん

Phactr1はウエスト症候群患者より遺伝子変異が同定された遺伝子であり、これまでに変異タンパク質の性状解析や大脳皮質形成に及ぼす影響について解析して きた。これまでの結果を踏まえて本研究では、PHACTR1変異の臨床的意義に焦点を絞り、患者由来リンパ芽球の生化学・細胞生物学的解析、結合する分子群 (Protein phosphatase 1、KCNT1(小児てんかん性脳症の原因遺伝子))との相互作用等の解析により、ウエスト症候群の分子病態メカニズムの一旦を解明する ことを目的とする。本年度はPHACTR1の発現抑制により引き起こされる大脳皮質神経細胞の移動障害がKCNT1の導入によりレスキューされるかについて検討した。子宮内胎仔脳遺伝子導入法により胎生14日目の神経幹細胞にPHACTR1発現抑制ベクターと野生型KCNT1発現ベクターを導入し、生後0日目、3日目に固定し、神経細胞の配置を観察したが、KCNT1によるレスキュー効果は認められなかった。またKCNT1のRNAiベクターについてオフターゲット効果のないことを確認するためにレスキュー実験を行なったがレスキュー効果が認められず、再度4個のベクターを作成し、その中からCOS7細胞において発現抑制効果が高い2個のベクターを選抜した。

PHACTR1是一种已通过西综合征患者的基因突变鉴定的基因，到目前为止，我们已经分析了突变蛋白的特性及其对脑皮质形成的影响。 Based on previous results, this study focuses on the clinical significance of PHACTR1 mutations, and aims to elucidate the molecular pathological mechanisms of West syndrome by analyzing biochemical and cellular biological analysis of patient-derived lymphoblasts, and the interactions with the binding molecules (Protein phosphatase 1, KCNT1 (gene causative genes of childhood epileptic脑病））。今年，我们调查了是否可以通过引入KCNT1来营救抑制PHACTR1表达引起的脑皮质神经元的迁移障碍。 PHACTR1表达抑制载体和野生型KCNT1表达载体在胚胎内胎儿胎儿脑基因转移的胚胎生命的第14天引入神经干细胞中，并在出生后第0和3天固定神经细胞，并且观察到神经细胞的放置，但没有观察到KCNT1的救援效应。此外，进行了救援实验，以确认KCNT1的RNAi载体没有脱靶效应，但未观察到救援效应，因此再次创建了四个矢量，因此选择了两个在COS7细胞中具有高表达抑制作用的向量。