歯周組織構成細胞による細胞間相互作用関連因子の同定と歯周病治療への応用

牙周组织构成细胞中细胞间相互作用相关因子的鉴定及其在牙周病治疗中的应用

基本信息

批准号：
21K09921
负责人：
中山洋平
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Nihon University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

炎症などの体外刺激に対して，歯肉接合上皮は歯面接着機構の恒常性を維持する。歯周病の治癒の際には，由来も性質も異なるセメント質，歯根膜および結合組織が協調して歯周組織が再構築していく。しかし，これら互いに近接する歯周組織間の細胞間相互作用は不明である。今回の研究は，歯肉上皮細胞，セメント芽細胞および歯根膜線維芽細胞3種の細胞から得られたConditional mediumを用いて，歯肉接合上皮の恒常性維持に関するセメント質および歯根膜からの細胞間相互作用に関わるマーカー遺伝子の発現変化を解析することを目的としている。歯肉上皮細胞として不死化ヒト歯肉上皮細胞（TIGKs-hTERT，以下TIGKｓ）をDCBMで培養した。歯根膜細胞にはhTERT-HPL（以下HPL）を使用し，セメント芽細胞としてhTERT-HCEM（以下HCEM）を使用した。HPLとHCEMはαMEMで培養し，80％コンフルエント後に無血清培地に交換し，その後，TIGKｓの培養に使用する培地であるDCBMに換えて72時間培養した。培地はフィルターにかけて回収し，それぞれの細胞からのConditional medium（C-CMおよびP-CM）とした。同様にTIGKｓ培養後の培地はT-CMとしてコントロールとした。TIGKｓを培養し，T-CM，C-CMおよびP-CMで48時間刺激して，回収した細胞からRNAを抽出した。Real-time PCRの結果，C-CMおよびP-CMで48時間刺激後，歯肉接合上皮特異的遺伝子であるAmtnおよびLamβ3 mRNAレベルが増加した。同様にP-CM刺激48時間でFDC-SP mRNA量は有意に増加した。次に，これらC-CMやP-CMによる歯肉接合上皮特異的遺伝子の発現変化に関わる細胞内シグナル伝達系を検索するため，マイクロアレイ解析を行った。

为了响应体外刺激，例如炎症，牙龈关节上皮保持牙齿表面粘附机制的稳态。当治愈牙周疾病时，具有不同起源和特性的牙周组织将协调以重建牙周组织。但是，这些紧密近端牙周组织之间的细胞细胞相互作用尚不清楚。本研究旨在分析使用从三种类型的牙龈上皮细胞，牙骨质细胞，牙周纤维纤维纤维细胞细胞获得的条件培养基，分析从骨质和牙周韧带中涉及细胞细胞相互作用的标记基因表达变化。永生的人牙龈上皮细胞（Tigks-htert，以下称为Tigks）在DCBM中培养为牙龈上皮细胞。 HTERT-HPL（以下称为HPL）用于牙周韧带细胞，HTERT-HCEM（以下称为HCEM）用于胶质细胞。将HPL和HCEM培养在αMEM中，在80％汇合后，将细胞用无血清培养基代替，然后孵育72小时，以代替DCBM，该培养基用于培养Tigks。对培养基进行过滤和收集，并从每个细胞中进行条件培养基（C-CM和P-CM）。类似地，将Tigks培养后的培养基用作对照作为T-CM。将Tigks培养，用T-CM，C-CM和P-CM刺激48小时，然后从收集的细胞中提取RNA。实时PCR显示，用C-CM和P-CM刺激48小时后，AMTN和LAMβ3MRNA的水平是牙龈合子上皮特异性基因。同样，在48小时的P-CM刺激下，FDC-SP mRNA水平显着增加。接下来，进行微阵列分析以搜索参与C-CM或P-CM的牙龈 - zygous上皮特异性基因表达变化的细胞内信号传导系统。