歯周組織構成細胞による細胞間相互作用関連因子の同定と歯周病治療への応用

牙周组织构成细胞中细胞间相互作用相关因子的鉴定及其在牙周病治疗中的应用

基本信息

批准号：
21K09921
负责人：
中山洋平
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Nihon University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

炎症などの体外刺激に対して，歯肉接合上皮は歯面接着機構の恒常性を維持する。歯周病の治癒の際には，由来も性質も異なるセメント質，歯根膜および結合組織が協調して歯周組織が再構築していく。しかし，これら互いに近接する歯周組織間の細胞間相互作用は不明である。今回の研究は，歯肉上皮細胞，セメント芽細胞および歯根膜線維芽細胞3種の細胞から得られたConditional mediumを用いて，歯肉接合上皮の恒常性維持に関するセメント質および歯根膜からの細胞間相互作用に関わるマーカー遺伝子の発現変化を解析することを目的としている。歯肉上皮細胞として不死化ヒト歯肉上皮細胞（TIGKs-hTERT，以下TIGKｓ）をDCBMで培養した。歯根膜細胞にはhTERT-HPL（以下HPL）を使用し，セメント芽細胞としてhTERT-HCEM（以下HCEM）を使用した。HPLとHCEMはαMEMで培養し，80％コンフルエント後に無血清培地に交換し，その後，TIGKｓの培養に使用する培地であるDCBMに換えて72時間培養した。培地はフィルターにかけて回収し，それぞれの細胞からのConditional medium（C-CMおよびP-CM）とした。同様にTIGKｓ培養後の培地はT-CMとしてコントロールとした。TIGKｓを培養し，T-CM，C-CMおよびP-CMで48時間刺激して，回収した細胞からRNAを抽出した。Real-time PCRの結果，C-CMおよびP-CMで48時間刺激後，歯肉接合上皮特異的遺伝子であるAmtnおよびLamβ3 mRNAレベルが増加した。同様にP-CM刺激48時間でFDC-SP mRNA量は有意に増加した。次に，これらC-CMやP-CMによる歯肉接合上皮特異的遺伝子の発現変化に関わる細胞内シグナル伝達系を検索するため，マイクロアレイ解析を行った。

牙龈交界上皮维持牙齿表面粘附机制的稳态，以应对炎症等外部刺激。在牙周病愈合过程中，牙周组织是通过牙骨质、牙周膜和结缔组织的协作重建的，这些组织具有不同的来源和特性。然而，这些相邻牙周组织之间的细胞间相互作用尚不清楚。本研究使用从牙龈上皮细胞、成牙骨质细胞和牙周膜成纤维细胞这三种细胞中获得的条件培养基，研究牙骨质和牙周膜的细胞间相互作用，以了解牙龈连接上皮的稳态变化。与动作相关的标记基因的表达。将永生化人牙龈上皮细胞(TIGKs-hTERT，以下简称TIGKs)在DCBM中培养作为牙龈上皮细胞。牙周膜细胞使用hTERT-HPL(以下称为HPL)，成牙骨质细胞使用hTERT-HCEM(以下称为HCEM)。 HPL和HCEM在αMEM中培养，达到80%汇合后，更换为无血清培养基，然后更换为培养TIGKs所用的DCBM培养基，培养72小时。通过过滤收集培养基并用作来自每个细胞的条件培养基（C-CM和P-CM）。类似地，培养TIGK后的培养基用作T-CM作为对照。将TIGK用T-CM、C-CM和P-CM培养并刺激48小时，并从收集的细胞中提取RNA。实时PCR结果显示，C-CM和P-CM刺激48小时后，牙龈交界上皮特异性基因Amtn和Lamβ3的mRNA水平增加。同样，P-CM 刺激 48 小时后，FDC-SP mRNA 的量显着增加。接下来，我们进行了微阵列分析，以寻找与 C-CM 和 P-CM 引起的牙龈交界上皮特异性基因表达变化有关的细胞内信号转导系统。