TKI治療抵抗性の慢性骨髄性白血病細胞に対する新規治療戦略の開発

开发针对 TKI 治疗耐药的慢性粒细胞白血病细胞的新治疗策略

基本信息

批准号：
21K08406
负责人：
高久智生
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Juntendo University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

慢性骨髄性白血病(CML)は、2000年のチロシンキナーゼ阻害薬(TKI)の開発により患者の予後は大きく改善した。さらに現在では計5種類のTKIがCML診療に用いられており、既にCMLは患者の予後を規定する因子ではなくなっている。しかし、TKI治療によるCML患者の10年生存率は90%程度である一方で、TKI治療の中止によりその多くが再発してしまい、依然としてTKI治療中止後の寛解維持率はCML患者全体では10から20%程度と大きく限定されている。これは、TKI治療後も極少量のCML細胞が残存している事が原因であると考えられており、本研究の目的はTKI治療後も残存するCML細胞を1細胞レベルで分取し、それら残存細胞に特異的な RNA発現プロファイルを明らかにすることで、治療抵抗性のCML細胞を標的とした新規の治療戦略の構築に必要な知見を得ることである。今年度はTKI治療が奏功した患者の骨髄からCD34陽性、CD38陰性の造血幹細胞を含む細胞集団をセルソーターで96ウェルプレートに1細胞ごとに分取した上で、RT-RamDA法を用いてBCR- ABLの検出を行った。結果として、BCR-ABL陽性細胞株であるK562を用いた実験では1細胞での分取および抽出したRNAを用いてBCR-ABLの検出に成功した。続くステップとして患者骨髄の保存細胞で同様の実験を行うも、患者骨髄の保存細胞では細胞のバイアビリティの低下、さらには個々の患者によりBCR、ABLの切断点が異なっている可能性が考えられたため、検出方法の変更および新たにゴーストサイトメトリーを導入した。ゴーストサイトメトリーは細胞内小器官の微小変化を検出可能で、BCR-ABL1染色体を導入した細胞株および患者検体を用いた鑑別を行ったところ、高精度で腫瘍細胞の鑑別が可能であった。

慢性髓样白血病（CML）在2000年随着酪氨酸激酶抑制剂（TKIS）的发展而显着改善了患者的结局。此外，目前总共在CML治疗中使用了五种TKI，并且CML不再是定义患者预后的因素。但是，尽管TKI治疗的CML患者的10年生存率约为90％，但大多数在TKI治疗中停用后重复出现，而在TKI治疗中停用后的缓解率仍然很大程度上限制为所有CML患者的10至20％。这被认为是由于以下事实：TKI治疗后少量的CML细胞保留，目的是将TKI治疗后在一个细胞水平上保留后保留的CML细胞分开，并揭示了对这些剩余细胞的RNA表达谱，从而获得了靶向治疗治疗策略的新知识所必需的知识。今年，使用RT-RAMDA方法将含有CD34阳性和CD38阴性造血干细胞的细胞种群分离为96孔板，并使用RT-RAMDA方法检测到BCR-ABL。结果，在使用K562的实验中，使用从一个细胞中提取的RNA成功检测到BCR-ABL阳性细胞系，BCR-ABL。随后的一步，使用保留的细胞在患者的骨髓中进行了类似的实验，但是人们认为患者骨髓中保留的细胞中的细胞活力降低了，并且BCR和ABL的断点可能因单个患者而有所不同，因此我们更改了检测方法并引入了新的幽灵细胞仪。幽灵细胞仪能够检测到细胞内细胞器的微小变化，并且使用用BCR-ABL1染色体和患者标本引入的细胞系进行区分时，肿瘤细胞的精度可以很高。

项目成果

期刊论文数量（3）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

AIを搭載したゴーストサイトメトリーによる末梢血CML細胞の鑑別

配备AI的鬼血细胞仪对外周血CML细胞的分化

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
Uhara H;Kiyohara Y;Uehara J;Fujisawa Y;Takenouchi T;Otsuka M;Uchi H;Fukushima S;Minami H;Hatsumichi M;Yamazaki N.;鈴木行人
通讯作者：
鈴木行人

ゴーストサイトメトリーを用いた非標識白血病細胞の判別性能の検証と、その形態・機能解析

鬼细胞术验证未标记白血病细胞的辨别性能并分析其形态和功能