難治性皮膚潰瘍におけるCD271陽性幹細胞の病態解明と革新的治療法の開発

阐明难治性皮肤溃疡中 CD271 阳性干细胞的病理学并开发创新疗法

基本信息

批准号：
21K08360
负责人：
岩田洋平
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Fujita Health University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K08360/
关键词：
CD271

项目摘要

今回の研究は、CD271ノックアウトマウスを用いた創傷治癒モデルの実施と解析である。そのため、2022年度は、昨年度に受精卵から個体化したCD271ノックアウトマウスの繁殖を行った。当初、個体化したノックアウトマウス同士のペアで繁殖を試みたが、十分な数のマウスが出生・発育せず繁殖が出来なかった。そのため、解決策として、ホモ変異のCD271ノックアウトマウスと野生型マウスをペアリングして、ヘテロ変異型のCD271ノックアウトマウスを作成することで繁殖を試みる事とした。野生型とホモ変異マウスのペアリングでは、無事にマウスが出生・発育し繁殖に成功した。出生したマウスの尾よりDNAを採取しPCR法を用いてジェノタイピングを行い、出生マウスがヘテロ変異であることを確認後、ヘテロ変異のマウス同士でペアリングした。ヘテロ変異マウス同士のペアからは、野生型マウス、ヘテロ変異を有するCD271ノックアウトマウス、ホモ変異を有するCD271ノックアウトマウスが出生する可能性があるため、出生したマウスを4週齢の時点で全てジェノタイピングし、スクリーニングを行った。スクリーニングにて、ホモ変異を有するCD271ノックアウトマウスが出生し成育していることが確認された。ホモ変異を有するCD271ノックアウトマウスが生殖可能な週齢まで成育させ、複数の繁殖ペアを作成した。現在ホモ変異を有するCD271ノックアウトマウスの繁殖ペアより出生したマウスの発育を進行中である。

当前的研究是使用CD271敲除小鼠对伤口愈合模型的实施和分析。因此，在2022年，CD271敲除小鼠于去年繁殖，这些小鼠是通过受精卵个体化的。最初，我们试图用成对的个性化基因敲除小鼠繁殖，但是足够数量的小鼠由于无法繁殖而无法繁殖。因此，作为一种解决方案，我们试图通过将同型突变的CD271敲除小鼠与野生型小鼠配对以创建异氧化物CD271敲除小鼠来繁殖。当将野生型和同性恋小鼠配对时，这些小鼠是成功并成功地复制的。从出生的小鼠的尾部收集DNA，并使用PCR进行基因分型，以确认出生的小鼠是异形的，然后与异质小鼠配对。由于可能是野生型小鼠，因此CD271敲除具有异质化的小鼠和具有同源性的CD271基因敲除小鼠，因此所有出生的小鼠均在4周龄的年龄较大并进行筛选。筛查证实，携带同源物的CD271敲除小鼠诞生并长大。携带同源物的CD271敲除小鼠被种植到肥沃的一周大小，以形成多个繁殖对。出生小鼠的发育目前正在从一对携带同源物的CD271敲除小鼠繁殖。