Impact of cysteine modifications of apolipoprotein E on the remnant lipoprotein metabolism

载脂蛋白E半胱氨酸修饰对残余脂蛋白代谢的影响

基本信息

批准号：
21K07310
负责人：
山内一由
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Shinshu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度当初は前年度に引き続き、種々の酸化還元修飾を加えたapoEをコーティングしたプレートにおけるLRP-1高発現ヒト線維芽細胞（GM00701)の接着性により、LRP1とapoEの相互作用に及ぼすapoE-Cys-thiol基のレドックス変化の影響を検討してきたが、本実験系では再現性のあるデータが得られず有意差の有無を的確に評価できなかった。そこで、本年度はapoE含有蛍光標識TG-richエマルジョン粒子(apoE-F-EP)を作製し、これをGM00701の培養液に添加して、apoE-F-EPの細胞との結合性、培養液からのクリアランス能、および異化能について蛍光強度を指標として、1) apoEアイソフォームの影響と、2) apoE-Cys-thiol基のレドックス変化の影響について検討を行ってきた。1）については、① apoE3-F-EPは主要な3種類のアイソフォームの中で最も効果的にLRP1に結合して異化されるのに対し、② apoE4-F-EPはapoE3-F-EPとほぼ同等のLRP1との結合性を有していながらも細胞内に取り込まれて異化される能力が最も低いこと、また、③ apoE2-F-EPの親和性はapoE3-F-EPおよびapoE4-F-EPの約70％と最も低いが、LDL受容体に対する親和性と比べると十分認められ、むしろapoE4-F-EPより十分な異化能が認められることを明らかにした。2）については、① TCEP還元はapoE3-F-EPとLRP1との結合性を増強する一方で異化能を抑制するが、apoE2-F-EPには影響しないこと、② apoAIIとのジスルフィド結合はapoE2-F-EPとLRP1との結合性を抑制する一方で異化能を促進することを明らかにした。

At the beginning of this year, following the previous year, we have investigated the effect of redox changes in the apoE-Cys-thiol group on the interaction of LRP1 and apoE due to the adhesion of LRP-1-high human fibroblasts (GM00701) expressing human fibroblasts (GM00701) on plates coated with apoE with various redox modifications, but this experimental system did not provide reproducible data并且无法准确评估是否存在任何显着差异。因此，今年，我们准备了包含ApoE的荧光标记为富含TG的乳液颗粒（APOE-F-EP），其中添加到GM00701的培养基中，并使用荧光强度为APOE-F-EP，清除能力的培养基和capoE效应的APOE-F-ep，清除能力的结合特性，以及2）效果。组。 Regarding 1), it was revealed that 1) that apoE3-F-EP is most effectively bound to LRP1 and catabolized, while 2) that apoE4-F-EP has almost the same binding properties as apoE3-F-EP, but has the lowest ability to be taken up and catabolized into cells, and 3) that the affinity of apoE2-F-EP is the lowest at about 70% of apoE3-F-EP and apoE4-F-EP, but is与其对LDL受体的亲和力相比，人们获得了良好的收获，并且比APOE4-F-EP具有更足够的分解代谢。关于2），据显示，1）TCEP还原在抑制分解代谢的同时增强了APOE3-F-EP和LRP1的结合特性，但对APOE2-F-EP没有影响，而2）使用Apoaii二硫键抑制ApoAII抑制APOE2-F-EP和LRP1的结合特性，同时促进catbolism。