Impact of cysteine modifications of apolipoprotein E on the remnant lipoprotein metabolism

载脂蛋白E半胱氨酸修饰对残余脂蛋白代谢的影响

基本信息

批准号：
21K07310
负责人：
山内一由
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Shinshu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度当初は前年度に引き続き、種々の酸化還元修飾を加えたapoEをコーティングしたプレートにおけるLRP-1高発現ヒト線維芽細胞（GM00701)の接着性により、LRP1とapoEの相互作用に及ぼすapoE-Cys-thiol基のレドックス変化の影響を検討してきたが、本実験系では再現性のあるデータが得られず有意差の有無を的確に評価できなかった。そこで、本年度はapoE含有蛍光標識TG-richエマルジョン粒子(apoE-F-EP)を作製し、これをGM00701の培養液に添加して、apoE-F-EPの細胞との結合性、培養液からのクリアランス能、および異化能について蛍光強度を指標として、1) apoEアイソフォームの影響と、2) apoE-Cys-thiol基のレドックス変化の影響について検討を行ってきた。1）については、① apoE3-F-EPは主要な3種類のアイソフォームの中で最も効果的にLRP1に結合して異化されるのに対し、② apoE4-F-EPはapoE3-F-EPとほぼ同等のLRP1との結合性を有していながらも細胞内に取り込まれて異化される能力が最も低いこと、また、③ apoE2-F-EPの親和性はapoE3-F-EPおよびapoE4-F-EPの約70％と最も低いが、LDL受容体に対する親和性と比べると十分認められ、むしろapoE4-F-EPより十分な異化能が認められることを明らかにした。2）については、① TCEP還元はapoE3-F-EPとLRP1との結合性を増強する一方で異化能を抑制するが、apoE2-F-EPには影響しないこと、② apoAIIとのジスルフィド結合はapoE2-F-EPとLRP1との結合性を抑制する一方で異化能を促進することを明らかにした。

今年年初，我们继去年的基础上，通过将高表达LRP-1的人成纤维细胞（GM00701）粘附在涂有apoE的平板上，研究了apoE-Cys对LRP1和apoE之间相互作用的影响。尽管我们研究了β-硫醇基团中氧化还原变化的影响，但我们无法在该实验系统中获得可重复的数据，并且无法准确评估是否存在显着差异。因此，今年我们制作了含有apoE的荧光标记富含TG的乳液颗粒（apoE-F-EP），并将其添加到GM00701的培养基中，以荧光强度为指标测定apoE的清除能力和分解代谢能力。 : 1) apoE 同工型的影响；2)我们研究了氧化还原变化对 apoE-Cys-硫醇基团的影响。关于1)，在三种主要异构体中，①apoE3-F-EP最有效地结合LRP1并被其分解代谢，而②apoE4-F-EP被apoE3-F-EP分解代谢，尽管它与LRP1具有几乎相同的结合能力。 LRP1，被细胞摄取并分解代谢的能力最低，③ apoE2-F-EP的亲和力最低，约为apoE3-F-EP和apoE4-F-EP的70%，但与LDL受体的亲和力相比，其亲和力得到了很好的认可，实际上比apoE3-F-EP和apoE4-F-EP的亲和力更好。可知apoE4-F-EP具有分解代谢能力。关于2)，(1)TCEP还原抑制分解代谢能力，同时增强apoE3-F-EP和LRP1之间的结合，但不影响apoE2-F-EP，并且(2)与apoAII的二硫键被揭示apoE2-F-EP 抑制 LRP1 的结合，同时促进其分解代谢能力。