スギ花粉β-グルカンの免疫学的緒活性とアレルギー疾患との関連性に関する研究

柳杉花粉β-葡聚糖免疫活性与过敏性疾病关系的研究

基本信息

批准号：
21K06634
负责人：
安達禎之
金额：
$ 2.58万
依托单位：
Tokyo University of Pharmacy and Life Science
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

1.花粉BGとデクチン-1との結合におけるアンタゴニストの解析デクチン-1アンタゴニストを探索する目的で、化合物ライブラリーのスクリーニングを行った。2021年度は低分子性化合物ライブラリー10,000種では有意な阻害剤を見出すことができなかったため、2022年度は中分子ライブラリー約9,000種について探索した。その結果、低分子ライブラリーよりもβ-グルカンとデクチン-1の結合阻害活性が高いものが数種類認められたが、デクチン-1中和抗体や低分子性(1→3)-β-D-グルカンの阻害活性に比べると弱く、次の評価系（細胞機能抑制）に適した阻害剤を見出すことができなかった。2.花粉BGの獲得免疫に対する作用の解析デクチン-1KOマウス及びWTマウスに対し花粉BGと他家アレルゲンとして卵白アルブミン（OVA）を経鼻あるいは腹腔内に併用投与し、くしゃみや鼻こすり、発赤などの臨床症状の確認及び鼻腔洗浄液中と血中におけるサイトカイン並びにアレルゲン特異的抗体の測定により臨床的パラメータを評価した。比較対象としてAlumアジュバントを使用した。また、脾臓のリンパ球を培養し、OVA抗原の二次刺激によって放出されたサイトカイン産生をELISAで測定し、リンパ球の活性比較から獲得免疫への影響を解析した。その結果、未分画の花粉粒（JCP）でマウスアレルギーモデルを検討した際にはスギ花粉アレルゲンに対する抗体価やサイトカイン産生促進が認められたが、スギ花粉外殻画分とOVA投与による実験ではAlumアジュバントとOVA投与のような有意な抗体価上昇が認められなかった。これらのことから、β-グルカンを含む花粉外殻は、各々分離した他家アレルゲンタンパク質に対するアジュバント活性は殆ど示せず、タンパク質抗原と花粉外殻が同時に免疫系に認識されることがアレルゲン特異的な獲得免疫誘導に必要であることが示唆された。

1.花粉BG与Dectin-1结合的拮抗剂分析为了寻找Dectin-1拮抗剂，筛选了化合物库。 2021 年，我们无法在 10,000 个小分子化合物的库中找到任何显着的抑制剂，因此在 2022 年，我们搜索了约 9,000 个中分子化合物的库。结果发现，几类对β-葡聚糖与Dectin-1的结合抑制活性比低分子文库更高的抗体，但比葡聚糖的抑制活性更弱，我们无法找到适合的抑制剂。下一个评价系统（细胞功能抑制）。 2.花粉BG对获得性免疫的影响分析Dectin-1 KO小鼠和WT小鼠分别鼻内或腹腔注射花粉BG和作为过敏原过敏原的卵清蛋白（OVA），出现打喷嚏、揉鼻子等症状。通过确认临床症状并测量鼻洗液和血液中的细胞因子和过敏原特异性抗体来评估临床参数。使用明矾佐剂进行比较。此外，培养脾脏淋巴细胞，通过ELISA测定OVA抗原二次刺激释放的细胞因子产生，并通过比较淋巴细胞活性分析对获得性免疫的影响。结果，当使用未分级的花粉粒（JCP）检查小鼠过敏模型时，观察到针对柳杉花粉过敏原的抗体滴度和细胞因子产生的促进，但在使用柳杉花粉壳分级和OVA施用的实验中，抗体没有显着增加。观察效价，与明矾佐剂和OVA施用的情况一样。基于这些事实，含有β-葡聚糖的花粉壳对分离的同种异体过敏原蛋白几乎没有表现出佐剂活性，并且蛋白质抗原和花粉壳同时被免疫系统识别的事实表明花粉壳具有过敏原特异性。有人认为这种蛋白质对于诱导获得性免疫是必需的。