B細胞共受容体の自己抗原認識機構と自己免疫疾患抑制の構造相関

B细胞共受体自身抗原识别机制与自身免疫性疾病抑制的结构关系

基本信息

批准号：
21K06045
负责人：
沼本修孝
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、B細胞抑制性共受容体CD72と自己抗原Sm/RNPとの複合体の立体構造を決定し、その構造情報に基づき特異的な分子認識機構を解明する。研究二年目の2022年度は、以下の通り研究を実施した。1. ヒト由来CD72リガンド結合ドメインの構造解析前年度の成果により、これまで試料調製が難しかったヒト由来CD72リガンド結合ドメインが安定的に調整できるようになった。結晶化実験の結果、ヒト由来CD72リガンド結合ドメインに特徴的な長い挿入ループ部位を短絡した発現コンストラクトについて、結晶構造解析に成功した。得られた構造から、ヒト由来CD72においては、推定されるリガンド結合部位の分子表面電荷分布は、マウス由来CD72のそれとは大きく異なることが明らかとなった。これにより、CD72のリガンド認識機構における分子間の相補的な電荷分布による寄与以外の認識機構の存在が確実に存在することが示された。2. ヒト由来CD72リガンド結合ドメインとSm/RNPとの複合体試料の調製ヒト由来CD72リガンド結合ドメインの試料調製については、長い挿入ループ部位を保持した試料も調製法を確立した。これについても結晶構造解析を進めると同時に、Sm/RNPとの複合体試料の調製法を検討した。これに伴い、ヒト由来CD72リガンド結合ドメインとSm/RNPなどのリガンド分子との相互作用解析を、表面プラズモン共鳴法（SPR）やELISA法などで行った。これまでのマウス由来CD72リガンド結合ドメインとSm/RNPとの複合体構造解析に加え、ヒト由来CD72リガンド結合ドメインとSm/RNPとの複合体構造解析も行える見通しとなり、試料調製を進めている。

在本研究中，我们将确定B细胞抑制性共受体CD72与自身抗原Sm/RNP复合物的三维结构，并根据该结构信息阐明具体的分子识别机制。 2022年，即研究的第二年，进行了以下研究。 1.人源CD72配体结合结构域的结构分析根据前一年获得的结果，现在可以稳定地制备以前难以制备的人源CD72配体结合结构域。作为结晶实验的结果，我们成功分析了表达构建体的晶体结构，其中人源 CD72 配体结合结构域的长插入环位点特征被缩短。获得的结构表明，在人源CD72中，推测的配体结合位点的分子表面电荷分布与小鼠源CD72显着不同。这清楚地证明了CD72的配体识别机制中除分子间互补电荷分布的贡献之外还存在识别机制。 2.人源CD72配体结合结构域和Sm/RNP复合样品的制备关于人源CD72配体结合结构域的样品制备，我们还建立了保留长插入的样品制备方法循环站点。对此，我们进行了晶体结构分析，同时研究了Sm/RNP复合样品的制备方法。据此，我们使用表面等离子共振（SPR）和ELISA方法分析了人源CD72配体结合结构域与Sm/RNP等配体分子之间的相互作用。除了小鼠来源的CD72配体结合结构域和Sm/RNP之间的复合物的结构分析之外，我们期望能够分析人源的CD72配体结合结构域和Sm/RNP之间的复合物结构，以及我们正在进行样品制备。