エクオール抱合代謝物がもたらす神経保護的活性物質としての新たな可能性

雌马酚缀合代谢物作为神经保护活性物质的新潜力

基本信息

批准号：
21K05457
负责人：
小原映
金额：
$ 2.58万
依托单位：
Kyorin University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

Equolは、daidzeinから腸内細菌により合成される化合物であり、エストロゲン作用だけでなく、神経保護作用を有するため、認知症予防効果の可能性が指摘されている。今年度は、まず組織中におけるEquol抱合代謝物の定量のため、検量線を作成した。血漿と脳における検量線は、0.19～78.64 ngの範囲において、r=0.9550以上の良好な直線性を得ることが出来た。結果、血漿100 uL中には、E-4’-G 2.7 ng、E-7-G 16.0 ng、E-4’-S 23.4 ng、E-7-S 36.7 ngが存在し、Equolは検出されなかった。現在脳およびその他の臓器の検量線および定量を検討中である。機器更新などで質量分析装置が使用出来ない期間があったため、R5年度計画であったEquol抱合代謝物の神経保護作用を検証するための細胞実験を先行して実施した。初代培養法として、まずC57BL/6マウス生後1～4日までの仔マウスの大脳を採取し、パパイン酵素処理したのち、Poly-D-lysineをコートしたフラスコに1×10^6個となるように播種した。5日後アストロサイトがコンフルエントになったことを確認し、200 rpmにて30分間振とうし、ミクログリアを回収した。この方法にてアストロサイトとミクログリアを分離し培養し、実験に用いた。これら培養細胞を用いることが出来るかの確認のため、LPS 1 ug/ｍLで24時間刺激させ、NO2-の生成を測定した。その結果アストロサイトとミクログリア共に、LPS刺激によるNO2-の生成が確認できた。このアストロサイトとミクログリアを用いて各抱合代謝物の神経保護作用を比較検討する予定である。

Equol是由肠道细菌从大泽蛋白合成的化合物，不仅具有雌激素作用，而且具有神经保护作用，因此已经指出，这可能是预防痴呆症的作用。今年，首先创建了校准曲线，以量化组织中的雌性共轭代谢产物。等离子体和大脑的校准曲线能够在0.19-78.64 ng的范围内获得r = 0.9550或更多的良好线性。结果，在100 ul的血浆中存在2.7 ng的E-4'-G，16.0 ng的E-7-G，23.4 ng的E-4'-s和36.7 ng的E-7-S，未检测到任何Equol。当前，正在研究校准曲线和大脑和其他器官的定量。由于设备的更新，在某个时期无法使用质谱仪，因此我们提前进行了细胞实验，以验证股东共轭代谢物的神经保护作用，该代谢物在R5财政年度计划。作为一种主要培养方法，首先，收集了出生后1至4天之间C57BL/6小鼠的大脑，用木瓜蛋白酶治疗，然后在用聚-D-赖氨酸涂层的烧瓶中播种，形成1×10^6。五天后，星形胶质细胞被证实是汇合，并通过在200 rpm摇动30分钟来收集小胶质细胞。使用此方法将星形胶质细胞和小胶质细胞分离和培养，并在实验中使用。为了确认是否可以使用这些培养的细胞，用LPS 1 UG/mL刺激细胞24小时，以测量NO2-的产生。结果，星形胶质细胞和小胶质细胞均表现出通过LPS刺激形成NO2-。我们将使用星形胶质细胞和小胶质细胞比较和检查每种共轭代谢产物的神经保护作用。