エクオール抱合代謝物がもたらす神経保護的活性物質としての新たな可能性

雌马酚缀合代谢物作为神经保护活性物质的新潜力

基本信息

批准号：
21K05457
负责人：
小原映
金额：
$ 2.58万
依托单位：
Kyorin University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

Equolは、daidzeinから腸内細菌により合成される化合物であり、エストロゲン作用だけでなく、神経保護作用を有するため、認知症予防効果の可能性が指摘されている。今年度は、まず組織中におけるEquol抱合代謝物の定量のため、検量線を作成した。血漿と脳における検量線は、0.19～78.64 ngの範囲において、r=0.9550以上の良好な直線性を得ることが出来た。結果、血漿100 uL中には、E-4’-G 2.7 ng、E-7-G 16.0 ng、E-4’-S 23.4 ng、E-7-S 36.7 ngが存在し、Equolは検出されなかった。現在脳およびその他の臓器の検量線および定量を検討中である。機器更新などで質量分析装置が使用出来ない期間があったため、R5年度計画であったEquol抱合代謝物の神経保護作用を検証するための細胞実験を先行して実施した。初代培養法として、まずC57BL/6マウス生後1～4日までの仔マウスの大脳を採取し、パパイン酵素処理したのち、Poly-D-lysineをコートしたフラスコに1×10^6個となるように播種した。5日後アストロサイトがコンフルエントになったことを確認し、200 rpmにて30分間振とうし、ミクログリアを回収した。この方法にてアストロサイトとミクログリアを分離し培養し、実験に用いた。これら培養細胞を用いることが出来るかの確認のため、LPS 1 ug/ｍLで24時間刺激させ、NO2-の生成を測定した。その結果アストロサイトとミクログリア共に、LPS刺激によるNO2-の生成が確認できた。このアストロサイトとミクログリアを用いて各抱合代謝物の神経保護作用を比較検討する予定である。

雌马酚是肠道细菌从黄豆苷元合成的化合物，它不仅具有雌激素作用，还具有神经保护作用，并被认为对痴呆症具有潜在的预防作用。今年，我们首先创建了一条校准曲线来量化组织中雌马酚结合的代谢物。血浆和脑的校准曲线在 0.19 至 78.64 ng 范围内表现出良好的线性，r=0.9550 或更高。结果，100uL血浆中存在2.7ng E-4'-G、16.0ng E-7-G、23.4ng E-4'-S和36.7ng E-7-S，没有检测到雌马酚。我们目前正在研究大脑和其他器官的校准曲线和量化。由于有一段时间因设备更新而无法使用质谱仪，因此提前进行了原计划在R5年进行的细胞实验，以验证雌马酚结合代谢物的神经保护作用。对于原代培养方法，首先收集1至4天龄的C57BL/6幼鼠的大脑，用木瓜蛋白酶处理，然后将其以1×密度放入聚-D-赖氨酸包被的烧瓶中。 10^6 播种。 5天后，确认星形胶质细胞汇合，将细胞以200rpm振荡30分钟以收集小胶质细胞。利用该方法分离培养星形胶质细胞和小胶质细胞，并用于实验。为了确认这些培养的细胞是否可以使用，用LPS 1 ug/mL刺激它们24小时并测量NO2-产生。结果，我们证实星形胶质细胞和小胶质细胞在 LPS 刺激下都会产生 NO2-。我们计划使用这些星形胶质细胞和小胶质细胞来比较检查每种缀合代谢物的神经保护作用。