糖鎖間相互作用のハイスループットなメカニズム解析に向けた可視サイズシステムの構築

构建用于糖链相互作用高通量机械分析的可见尺寸系统

基本信息

批准号：
21K05298
负责人：
長谷川輝明
金额：
$ 2万
依托单位：
Toyo University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2026-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

バクテリアセルロースから構成されたヒドロゲルであるナタデココに対する化学修飾を行い、LeX糖鎖やGM3糖鎖、さらにはGg3糖鎖を導入したナタデココ（それぞれNDC-LeX、NDC-GM3、およびNDC-Gg3と略）を合成した。元素分析によるN/C値や、化学構造選択的な各種染色剤を用いた染色試験により、これらの糖鎖を導入したナタデココが合成できていることを確認した。また、特定の糖鎖を認識するレクチンを用いるとこれらの糖修飾NDCが水中で会合することでも、これらの糖鎖がナタデココに導入できていることを確認した。水溶液中でNDC-LeX同士の会合試験を行い、Ca2+またはNa+の共存でNDC-LeX同士が会合することを確認した。また参照物質としてLeX糖鎖からFuc残基を削除した部分構造であるLacNAcを導入したNDC-LacNAc、Fuc残基に加えてGal残基も削除した部分構造であるGlcNAcを導入したNDC-GlcNAcなども合成し、これらの会合試験も行った。これらの参照実験により、LeX同士の会合にはFuc残基とGal残基の両者が必須であることを確認した。また、NDC-GM3とNDC-Gg3との間のヘテロな糖鎖間相互作用についても評価を行った。NDC-GM3とNDC-Gg3との間の相互作用はCa2+によって誘導されることを確認した。これに関する参照実験としては、GM3の部分構造であるLacおよびGlcを導入したNDC-LacおよびNDC-Glcを用いて、これらの糖修飾ナタデココとGg3との間の相互作用を評価し、GM3糖鎖の末端シアル酸や中間Gal残基がGg3との相互作用に重要であることを確認した。また、NDC-Gg3の代わりにNDC-LacまたはNDC-Galを用いた参照実験でも、Gg3糖鎖のGalNAcや中間Gal残基がGg3との相互作用に重要であることを確認した。

Nata de Coco是一种由细菌纤维素组成的水凝胶，经过化学修饰引入了LeX糖链、GM3糖链和Gg3糖链（分别缩写为NDC-LeX、NDC-GM3和NDC-Gg3）。通过元素分析和使用各种化学结构选择性染料的染色测试确定的N/C值证实可以合成掺入这些糖链的Nata de Coco。我们还证实，可以通过使用识别特定糖链的凝集素并允许这些糖修饰的 NDC 在水中缔合，将这些糖链引入椰子中。我们在水溶液中进行了NDC-LeX之间的缔合测试，并证实NDC-LeX在Ca2+或Na+存在下彼此缔合。另外，作为参考物质，在NDC-LacNAc中导入了从LeX糖链中删除了Fuc残基的部分结构LacNAc，在NDC-GlcNAc中导入了部分结构GlcNAc除了Fuc残基之外，还合成了Gal残基并进行了它们的关联测试。这些参考实验证实 Fuc 和 Gal 残基对于 LeX 关联都是必需的。我们还评估了 NDC-GM3 和 NDC-Gg3 之间异源糖链之间的相互作用。我们证实NDC-GM3和NDC-Gg3之间的相互作用是由Ca2+诱导的。作为与此相关的参考实验，我们使用引入了GM3的部分结构Lac和Glc的NDC-Lac和NDC-Glc，并评估了这些糖修饰的Nata de Coco和Gg3之间的相互作用。 Gg3 的末端唾液酸和中间 Gal 残基对于与 Gg3 的相互作用很重要。此外，在使用NDC-Lac或NDC-Gal代替NDC-Gg3的参考实验中，我们证实Gg3糖链中的GalNAc和中间Gal残基对于与Gg3的相互作用很重要。