健康食品に含まれるアレルギー原因食物由来タンパク成分の一斉分析法の開発

保健食品中引起过敏的蛋白质成分同时分析方法的开发

• 批准号: 21K02163
• 负责人: 清田 恭平
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: Osaka Institute of Public Health
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K02163/
• 关键词: アレルギー原因食物; 鶏卵タンパク; 鶏卵アレルゲン; いわゆる健康食品; アレルゲン分析法; 質量分析計; タンパク分析法; 機能性タンパク質; 食物アレルゲン

いわゆる健康食品や保健機能食品の一部においては、アレルギー原因食物由来の機能性タンパクが使用されている。これらの食品では、機能性タンパク含有量やアレルゲン摂取リスクの情報は特に重要であることから、その信頼性を下支えする正確性と効率性を備えた食品由来タンパク分析法の開発が必要とされている。そこで本研究では、機能性タンパクを含み、かつ代表的なアレルギー原因食物である鶏卵を分析対象として選定し、その複数種類のタンパクに着目した。これらを同時定量するために、鶏卵タンパク由来ペプチドを指標とし、液体クロマトグラフ-タンデム型質量分析計（LC-MS/MS）を利用した手法を採用し、これまでに標準品を対象に分析条件を検討した。本年度は、計画に沿って分析法開発を継続した。分析法の適用範囲を実試料へと拡大するために、原材料として鶏卵を使用した加工食品（ケーキ、プリン等）を対象に、抽出条件や前処理条件の最適化に取り組んだ。鶏卵タンパクは加熱加工により変性し、水に対して不溶化するため、分析が困難となり得る。そこで、変性タンパクを可溶化および抽出して分析を可能とするために、タンパク抽出液に還元剤等の試薬を添加して、抽出条件を検討した。また、前処理（タンパクのトリプシン消化等）に対する負の影響を抑えるために、還元剤の濃度条件を検討した。これらの条件最適化により、実試料において、従来法と比較して鶏卵タンパクの高感度な分析が可能となった。今後、複数種類タンパクの同時定量法として、構築した分析法の性能を確認することで、鶏卵に関する食品の信頼性確保に役立つことが期待され、その有用性や発展性は高いと考えられる。

一些所谓的保健食品和健康功能食品使用源自引起过敏的食物的功能蛋白。在这些食物中，有关功能蛋白含量和过敏原摄入风险的信息尤为重要，并且需要开发一种以准确性和效率来分析食品来源的蛋白质的方法，以支持其可靠性。因此，在这项研究中，鸡蛋含有功能性蛋白质并且是典型的引起过敏的食物，被选为分析的靶标，并专注于多种类型的蛋白质。为了量化这些量子，我们使用液态色谱传播质谱仪（LC-MS/MS）使用源自鸡蛋蛋白作为指数的肽的方法，到目前为止，我们已经检查了标准产品的分析条件。今年，我们继续根据计划制定分析方法。为了将分析方法的范围扩展到实际样品，我们致力于优化使用鸡蛋作为原材料的加工食品（蛋糕，布丁等）的提取和预处理条件。卵子蛋白通过加热而变性，并在水中不溶解，从而难以分析。因此，为了溶解并提取修饰的蛋白质以实现分析，将诸如还原剂之类的试剂添加到蛋白质提取物溶液中，并检查了提取条件。此外，为了抑制对预处理的负面影响（例如蛋白质的胰蛋白酶消化），研究了还原剂的浓度条件。与常规方法相比，这些优化使对实际样品中鸡蛋蛋白的高度敏感分析成为可能。将来，可以预期，通过检查构建的分析方法的性能作为多种蛋白质的同时定量，它将有助于确保与鸡蛋有关的食物的可靠性，并被认为具有非常有用且高度发达的食物。

项目成果

鶏卵アレルゲン6種類分析における抽出およびトリプシン消化の条件最適化の試み

尝试优化六种鸡蛋过敏原分析中的提取和胰蛋白酶消化条件

• 发表时间: 2022
• 作者: 清田恭平;吉光真人;松井啓史;内田耕太郎
• 通讯作者: 内田耕太郎